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双抗夹心法elisa后空白孔OD值高于部分样本OD值... 已解决
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双抗夹心法elisa后空白孔OD值高于部分样本OD值
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2016-07-15 07:35
这个结果是一个失败的试验 1、标准品在0-31.25 范围内根本没有梯度结果呈现。 原因：（1）试剂盒灵敏度不够高，（2）试剂盒显色系统不好 2、样本和标准品结果几乎在一样的范围内，根本就没区分度。 原因（1）试剂盒质量差，（2）试剂盒选的不够好 建议以后再做类似需要做标准曲线的实验时的步骤： step1： 只做试剂盒的标准曲线，观察试剂盒的标准曲线是否能够呈现良好的梯度趋势。良好的标准曲线范围如下： “0”浓度 OD值小于0.1， “中间浓度”OD值 介于0.500-1.000之间， “最高浓度”OD值大于1.0，最好能到1.5~2.5。 step2： 试剂盒标准曲线和样本同时做，并且附带空白孔 step3： 选择合适的标准曲线拟合方程式，进行样本浓度计算，方程式的选择取决于你的标准曲线的走势。 一般双对数方程式可以适用绝大部分的标准曲线。 欢迎咨询 |
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2016-07-10 06:19
1、针对检测OD值没有梯度，我认为可能一是由抗体原因导致，如果这两株抗体不能配对，检测结果就会出现你呈现的结果那样；二有可能是抗体对你所测抗原的特异性不佳，也会出现不会有梯度的情况2、针对本底较高的情况，有可能是两方面因素导致，一是样本稀释液不合适，会导致非特异反应；二是抗体包被板封闭不完全，导致酶标抗体非特异吸附在板子上以上纯属个人意见，仅供参考
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2016-07-10 06:59
你标准品浓度是0的时候，出来的结果，就是阴性对照，或者空白的结果，但是你标准品浓度为0时，出来的结果OD值直接就是0.2左右，说明你的试剂盒背景信号值就是0.2左右，要计算就得把所有的数据减去你的空白值后再看数据。但是不论怎么看，你这个试验的数据都是失败的，不能说明问题。 你测定的样本的结果基本上全部都是空白值。 重新按照我上边说的方法再做一次，如果标准曲线还是做不出来梯度，只能更换试剂盒 曲线拟合 多项式也可以，只要相关系数好 另外你可以把操作过程写出来，才好分析。 建议你 1、增加个步骤的反应时间，原来是30分钟的，延长到1小时 2、增加显色时间，原来是20分钟显色时间，增加到30分钟甚至更久， 但是一定注意，如果改变了实验时间，以后全部要按照同样的方式操作，否则数据没有可比性 |
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