• 游客
收藏 | 举报 2005-04-02 21:24   关注:226   回答:3

大肠杆菌怎么破碎最好呀?...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-05-07 18:21
大肠杆菌怎么破碎最好呀?

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  • 游客
举报 2005-04-04 04:46
按1ml菌液×OD600加入100μl的比例加入2×上样缓冲液,混匀,-20℃保存或直接上样,一般上10ul就可以了
超声一般200w,10s,15s间隔,30次
1ml离心后重悬的菌液这样超30次即可,若是20ml超90次
你加溶菌酶后注意不要超声过头,否则菌液会炭化
你说的一片蓝是不是上样太多了?
  • 游客
举报 2005-04-03 00:29
一片蓝可能是超声过度,溶菌太厉害了,离心的时候没有离干净
最好先了解一下目标蛋白是周质还是胞质表达的,如果是周质,可以不用超声,用高渗就可以抽提。一般做超声的时候,要结合镜检结果来判断是否超声完全,可先做一个超声强度和次数的实验。
  • 游客
举报 2005-04-13 00:54
谢谢大家,我试着将超声时间缩短次数增加后,效果好的多了