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2016-04-14 09:21
觉得不可以，并没有办法保证所有都连接成功。反正构建载体之后都要表达，都得转到酵母中。一般我们都是转到酵母中进行PCR验证，看是否连接成功，然后再多挑选几个转化子进行小量表达，看各转化子的表达水平，最后选择表达量最高的转化子进行接下来的蛋白表达。 |
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2016-04-11 06:48
首先，可以实现，但是跑电泳是跑琼脂糖凝叫电泳，SDS-PAGE应该是不能实现的； 其次，我们为什么要这样做呢？我们构建载体，插入目的基因，不是为了验证两者是否插入成功啊，他两有没有插入成功不是我的实验目的，而是为了获得蛋白，转化的时候看看有没有插入成功，顺便可以验证一下蛋白的表达情况，有没有表达，表达量如何，如果不行，可能还要重新优化序列，重新合成质粒呢，所以转化其实是必要的，然后通过原核表达系统或哺乳动物表达系统或酵母表达系统去实现蛋白的表达，最终获得蛋白。。。 |
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2016-04-18 06:11
可以，看到smear现象多半就做出来了。 |
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2016-04-14 17:07
与同学探讨过后发现这个方法是不可行的，因为无论连接成功与否都会出现载体的条带，可以是连接成功的条带，也可以是没有连接成功的酶切好的载体的条带，这是不好区分的，谢谢各位了。 |
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