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【求助】请问引物稀释时能用漩涡振荡器震荡吗？... 已解决
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【求助】请问引物稀释时能用漩涡振荡器震荡吗？
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2008-01-23 12:45
溶解引物
干燥后的引物质地非常疏松，开盖前最好离心一下，3000-4000转/分钟，1分钟，防止开盖时引物散失。 根据计算出的体积加入适量的无核酸酶的双蒸水（PH>6.0）或TE缓冲液（PH 7.5-8.0），室温放置几分钟，振荡助溶，离心将溶液收集到管底。 保存引物 引物合成后，经过一系列处理和纯化步骤，旋转干燥而成片状物质。引物在溶解前，室温状态下可以长期保存。没有溶解的引物非常稳定，可以在-20℃下保存至少1年。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。 引物的浓度 溶解好的引物可以事先稀释为100μmoL/L的储存液，分装数份保存于-20℃冰箱，可以保存至少半年以上。使用前，将浓溶液稀释成工作液（10 pmol/ml或20 pmol/ml）后进行实验。 溶解前您需要核对合成报告单和引物标签上的引物OD数是否一致。 |
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2008-01-23 10:52
1. 可以漩涡振荡，引物很短没问题的，超过1Kb以上的最好不要。
2. 引物稀释，5uM？是不是太低了？我一般先配成100uM的储存液，然后1：5稀释成20uM的工作液，0.25+0.25／25ul体系，终浓度0.2uM。 3. 反复冻融对引物影响倒不是很大，但是容易污染，所以建议分装。 |
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