• 游客
收藏 | 举报 2017-05-02 16:49   关注:224   回答:12

通过CRISPR/Cas方法敲除细胞内的一个基因,能通过设计...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-03-28 19:36
通过CRISPR/Cas方法敲除细胞内的一个基因,能通过设计引物用PCR的方法检测敲除效率吗?

我来回答
  • 游客
举报 2017-05-08 19:38

你有敲除相关的信息吗,比如当时的测序结果,到底敲掉的是哪里,掉了几个碱基之类的,如果什么都不知道的话,直接用引物PCR,可能不管敲没敲掉都是可以P出来的而且带比较相近,区分不出来,如果有相关信息,就在敲掉的位置设计引物,看是否能达到WT能P出来,KO组p不出来。

  • 游客
举报 2017-05-10 21:48
liuzz2016

如题,简单的说就是我现在有一个gene A敲除的细胞株,其他人敲除的,我没这个A的抗体,想用PCR的方法来检测敲除效果。此法可行否?


p出来条带送测序。
  • 游客
举报 2017-05-08 18:48
sicaujj

p出来条带送测序。

这个PCR产物必须覆盖到突变位点?也行

  • 游客
举报 2017-05-02 23:37

展开引用

午后的红太狼

你有敲除相关的信息吗,比如当时的测序结果,到底敲掉的是哪里,掉了几个碱基之类的,如果什么都不知道的话,直接用引物PCR,可能不管敲没敲掉都是可以P出来的而且带比较相近,区分不出来,如果有相关信息,就在敲掉的位置设计引物,看是否能达到WT能P出来,KO组p不出来。

......

如果是单基因突变或敲除造成的密码子移位导致的敲除,因为突变范围小,在敲除的位点上设计引物做PCR,会不会照样能P出来。 简单的说,可能就删掉一个碱基,会影响到20个bp长的引物的PCR么? 求指点。

  • 游客
举报 2017-05-11 13:35
liuzz2016

如果是单基因突变或敲除造成的密码子移位导致的敲除,因为突变范围小,在敲除的位点上设计引物做PCR,会不会照样能P出来。 简单的说,可能就删掉一个碱基,会影响到20个bp长的引物的PCR么? 求指点。


不会是只有一个碱基的缺失的,我之前做过测序,一半以上都是缺失的十个碱基左右。所以也可以根据pcr产物的有无来判断。但是做ko是要移码突变才可以,只要是缺失的3的倍数碱基很有可能对这个蛋白的功能没有影响的。
  • 游客
举报 2017-05-05 18:35
sicaujj

p出来条带送测序。

这样果然是最简单的办法,是我想复杂啦

  • 游客
举报 2017-05-06 03:24
liuzz2016

如果是单基因突变或敲除造成的密码子移位导致的敲除,因为突变范围小,在敲除的位点上设计引物做PCR,会不会照样能P出来。 简单的说,可能就删掉一个碱基,会影响到20个bp长的引物的PCR么? 求指点。

只有1个碱基的话,不会影响PCR的结果

  • 游客
举报 2017-05-05 21:51
请问你是打算拿Cas敲出基因嘛
  • 游客
举报 2017-05-08 12:20
sicaujj

p出来条带送测序。

你好,我想问一下,我P出来后直接送测序就可以了吗?

还需要提供其他的哪些信息吗?

  • 游客
举报 2017-05-11 20:09
sicaujj

p出来条带送测序。

测序的引物该提供什么呢?

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