兔肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒

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单价: 1200.00
品牌: TBD
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更新: 2020-06-26
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货号: LPZ2014R
供应商: 上海研谨生物科技
数量: 大量供应
英文名: 上海研谨生物科技
规格: 3X200ml/Kit
产品类别:肿瘤细胞的分离
 
产品编号:LPZ2014R
 
产品名称:兔肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒
 
产品规格:3X200ml/Kit
 
产品价格:¥1200.00元
 
本品用于分离兔肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞












 
“XXXX”动物肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞
 
分离液实验方法
 
技术文档编号:TBD0052SOP
 
【产品规格】
 
3×200ml/Kit
 
【产品组成】
 
为方便广大用户使用,试剂内容如下:
 
  名称 产品编号 规格
       
A 分离液 1   200ml
       
B 分离液 2   200ml
       
C 分离液 3   200ml
       
D 试剂 F(赠品) F2013TBD 200ml
       
E 样本稀释液(赠品) 2010C1119 200ml
F 清洗液(赠品) 2010X1118 200ml
G 说明书   1 份
       
 
【实验前准备】
 
适用仪器:最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
 
【检验方法】
 
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
 
  • 首先制备组织单细胞悬液,制备方法详见“组织单细胞悬液制备技术”。取一支适当的离心管,依次小心加入分离液 1、分离液 2、分离液 3(体积比为 3:2:1,体积总量与组织单细胞悬液体积相等),制成梯度界面,各液面分层一定要清晰。(如组织单细胞悬液样本量为 6ml,则加入分离液 1:3ml、分离液 2:2ml、分离液 3:1ml。)
 
  • 用吸管小心吸取组织悬液样本加于分离液液面上,400-500g,离心 20-30min(注:根据组织悬液样本量确定离心条件,样本量越多,离心力越大,离心时间越长,最大离心力可达 1200g,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果)。
  • 离心后,此时离心管中将出现两层环状乳白色细胞层。
 
  • 用吸管吸取两层环状目的细胞层(如有红细胞混杂则需用红细胞裂解液(需另购)裂解
 
红细胞,具体操作说明详见“红细胞裂解液使用说明”)到 15ml 离心管中,往所得离心
 
 
管中加入 10ml 清洗液(产品编号:2010X1118),混匀细胞。
 
  • 250g,离心 10min。
 
  • 弃上清。
 
  • 用吸管以 5ml 清洗液(产品编号:2010X1118)重悬所得细胞。
 
  • 250g,离心 10min。
 
  • 重复 6、7、8,弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
 
【注意事项】
 
  • 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果,最好在取样 2h 内进行实验,样品存放时间越长,细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
 
  • 本实验最好不要使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。
 
  • 如所实验后细胞得率或活性过低,请联系技术支持以寻求帮助。
 
【储存条件及有效期】
 
常温保存,有效期 2 年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启
 
封后置常温保存。
 
【参考值(参考范围)】
 
本实验肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞提取率大于 80%。
 
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例,用户可适当进行参考。
 
  红细胞   白细胞   血小板
           
    (4.0-10.0)×109  
含量(个/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞 (1.0-3.0)×1011
    50%-70% 20%-40% 3%-8%  
           
【相关实验技术方案】        
 
  • 组织单细胞悬液制备技术。
 
  • 所获得肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞的培养技术。
 
  • 所获得肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞的核酸提取技术。
 
  • 所获得肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞的鉴定方法

A.流式细胞技术
 
B.免疫组化技术
 
C.原位杂交技术
 
D.PCR 技术
 
 
【可能存在的问题及解决方法】
 
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示:
 
出现情况 出现原因 建议解决方案
     
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 转速过小或离心时间过短 适当增减转速
   
离心后目的细胞存在于分离液中 转速过大或离心时间过长
 
     
离心后白环层弥散 细胞密度过大 调整细胞密度
   
离心后白环层太浅或看不见 细胞密度过小
 
     
 
  • 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心,其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时,恒定离心时间,对离心转速进行调整。
 
  • 本分离液依照国际标准,全部使用药用级原料,性能指标与国产同类产品略有不同,可能出现红细胞沉降不完全的情况,可以适当加大离心转速。
 
注:在对离心条件进行调整时,离心转速的加减以 50-100g 为基数,直至达到最佳分离效果,
 
离心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
 
 
温馨提示:不可用于临床治疗。