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货号：	B40018
规格：	2000rxns

Mouse Direct PCR Kit

Mouse Direct PCR Kit
Quick & Easy, Cost-effective, Reliable Results

产品简介

本试剂盒专为小鼠快速基因型鉴定（Genotyping）而研制。试剂盒中包含的高效组织消化液（Protease Plus）能够迅速从小鼠尾巴、耳朵或脚趾等组织中释放足量的基因组DNA，并且无需对其进行抽提与纯化，可直接将消化产物作为模板加入抗干扰型2 x M-PCR OPTITM Mix中进行PCR扩增，PCR扩增产物（含有染料）可直接点样进行电泳观察。实验操作简便而省时。

应用范围

小鼠基因型鉴定（尾巴、耳朵或脚趾）
小鼠基因组DNA扩增、测序

产品组成

	B40013 (200 rxns)	B40015 (500 rxns)	B40018 (2000 rxns)
Buffer L (mL)	20	50	200
Protease Plus (mL)	0.4	1	4
2 x M-PCR OPTI™ Mix (mL)	2	5	20
User Guide	Yes	Yes	Yes

储存条件

Buffer L 4℃保存，其余组分-20℃保存。保质期一年。

操作步骤

1. 组织消化

1.1. 按小鼠数量配制组织消化液，试剂比例如下：

	（单样本）
Protease Plus	2 μL
Buffer L	100 μL

组织消化液现用现配，充分混匀后使用。

1.2. 向每个含有样本的EP管中加入100 μL新鲜组织消化液，55℃水浴/金属浴中消化30 min。组织消化时，务必将组织完全浸没于消化液中。消化完成后，组织外观上仍然完整，但足量的基因组DNA已经释放，不影响后续的PCR实验。

1.3. 将样本置于95℃水浴/金属浴中孵育5 min以灭活消化液中的蛋白酶活性。消化后的上清或连同组织的消化液可于-20℃保存三个月。

2. PCR扩增

2.1. PCR反应体系：

反应体系的配制最好于低温环境下（如冰浴）完成，以保证PCR扩增效率和扩增特异性。

PCR 反应组分	20 μL 反应体系 (μL)	50 μL 反应体系 (μL)
ddH2O	7	18
正向引物 (10 μM)	0.5	1
反向引物 (10 μM)	0.5	1
模板（消化产物）	2	5
2 x M-PCR OPTI™ Mix	10	25

2.2. PCR反应条件：

温度 (℃)	时间	循环数
94	5 min	1
94	20 sec	30-40
50-65	30 sec
72	X min (2kb/min)
72	5 min	1
12	--	1

PCR产物的3’端带有碱基A，可直接克隆至T载体，用于DNA测序。

3. 琼脂糖凝胶电泳

试剂2 x M-PCR OPTITM Mix中含有溴酚蓝染料，PCR产物可直接点样进行琼脂糖凝胶电泳。

常见问题与对策

常见问题	可能原因	对策
样本组与阳性对照组均无扩增条带	PCR反应条件设置不当	优化PCR反应条件
样本组与阳性对照组均无扩增条带	PCR引物质量问题	重新设计PCR引物
样本组无扩增条带而阳性对照组正常	不当储存或长期储存引起试剂活性丧失	使用新鲜的试剂
	组织消化不够充分	延长55℃消化时间至60 min
	蛋白酶未被完全灭活	消化产物在95-100℃孵育5 min
存在非特异性扩增条带	PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高	增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度
	PCR引物错配	重新设计PCR引物
	配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久	PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应

实验数据

更多详情请访问唯一官方网站http://www.biotool.cn/product/Mouse-Direct-PCR.html

温馨提示：不可用于临床治疗。

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