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| 提供商： | 晶莱生物 |
| 服务名称： | 凋亡因子Caspase-3/8/9检测 |
| 规格： | 凋亡因子Caspase-3/8/9检测 |
【晶莱生物】Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也称CPP32，是细胞凋亡过程中的一个关键酶，可以剪切procaspase 2、6、7和9，并可以直接特异性剪切许多caspase底物，包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase)，ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease)，gelsolin和fodrin等。这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用，包括染色质固缩，DNA片段化等。同时caspase 3对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用。
检测原理基于casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline)，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。pNA在405nm附近有强吸收。参照黄色产物pNA制作的标准曲线，可以作为定量caspase 3酶活性的标准品。
Caspase-8
Caspase 8通常以酶原的形式存在，在细胞凋亡的信号转导过程中被激活，Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase，在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡过程中caspase 8被激活，形成一个由p18和p10组成的二聚体，进一步激活下游的caspase 4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。
本方法基于Caspase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline)，从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线，可以计算样品的Caspase 8酶活性。
Caspase-9
Caspase 9也称ICE-LAP6或Mch6，是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase。线粒体释放细胞色素c以后，caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物，同时被激活。激活的caspase 9可以激活细胞凋亡的最关键酶caspase 3，从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可以通过磷酸化进行调控。
本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline)，从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 9的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线，可以计算样品的Caspase 9酶活性。
Caspase1
Caspase2
Caspase4
Caspase6
凋亡因子Caspase-3/8/9检测样本准备：
1）细胞样品：取1×107个细胞（约1个T25的培养瓶细胞量），600g 4℃离心5分钟收集细胞，小心吸除上清，PBS洗涤一次。吸取上清后，每管细胞样品加入100ul裂解液重悬沉淀，冰浴裂解15分钟。4℃ 16,000g离心10-15分钟，把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70℃保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度，尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml。
2）组织样品：约每10mg组织加入100ul裂解液，在冰浴上用玻璃匀浆器匀浆。然后把匀浆液转移到1.5ml离心管中，冰浴再裂解5分钟。4℃ 16,000g离心10-15分钟，把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70℃保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度，尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml。
Caspase-3活性检测标准曲线
实验周期：7-10个工作日内完成，重复检测优惠。
客户注意事项
1、抗体：事先咨询晶莱生物，明确抗体种属以及是否有该抗体可使用，如无可由双方协商而定，客户自己购买提供或我公司代购；
2、标本收集与保存：
组织样品 新鲜组织放入液氮或-70度保存，组织不少于100mg（约绿豆大小）；
培养细胞 通过细胞计数取不少于2000000个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-70℃，避免反复冻融）；
血液细胞标本 以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，保存（-70℃可长期保存，避免反复冻融）
血清或细胞培养液标本 离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（以上4℃可保存15-20天，-70℃可长期保存，避免反复冻融）
3、样本运输：可选以下任何的一种方式寄送标本
组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输；
细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶（密封保证不污染，培养液不漏出，细胞不要长得太满，50%左右，灌满培养液）；
血清或上清液直接加冰袋寄送（密封保证液体不漏出，视路途远近2-3天可到达）。
收费标准/服务周期/提供结果：
欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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