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份 库存999份
| 货号： | CSB2-50 |
| 保存条件： | 室温保存 |
| 供应商： | 北京赛百盛基因技术有限公司 |
| 保质期： | 一年 |
SiMax IITMPCR产物纯化及胶回收试剂盒
使用说明
概述
本实验方法的基本原理是，在高盐、低pH值状态下，硅胶膜专一性地吸附DNA；而在低盐或水溶液状态下，DNA被洗脱下来。此法简便快捷，不仅用于从琼脂糖凝胶中纯化回收目的DNA片段，也可用于PCR反应液的纯化、各种酶反应体系中DNA片段的纯化、标记探针的回收及DNA样品的浓缩，整个过程只需几分钟，适用范围从300bp到十几kb。500b上的片段，回收率达90%左右；300bp-500bp回收率达80%左右。
试剂盒包装及组成
50次
1. GP结合液 50ml
2. 洗脱液 2.5ml
3. 离心纯化柱S 50套
4. 产品说明书 1份
实验前注意事项
※室温低于25℃时，溶液可能出现结晶或盐析，此时请务必预热，使其完全溶解后使用。
用户自备的仪器及试剂
1. 台式高速离心机
2. 1.5ml或2ml离心管及离心管架
3. 100µl、1000µl移液器及吸头
4. 80%异丙醇或80%乙醇
操作方法
一、从琼脂糖中纯化/回收DNA片段
1.切取含DNA片段的琼脂糖后捣碎，按重量/体积比1:3（琼脂糖重量：GP结合液的体积）加入GP结合液。如200mg琼脂糖加600ul GP结合液。
将切取的琼脂糖捣碎有利于加速下一步凝胶的融化。
2. 50～60ºC水浴10分钟，胶完全融化即可，其间可上下颠倒2～3次。
3.将溶液转入离心纯化柱中，静置5分钟使DNA充分与硅胶膜结合，10,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
适当增加DNA与硅胶膜结合的时间，使DNA与硅胶膜充分结合，能在一定程度上提高回收率。
4. 加入750µl的80%异丙醇(或80%乙醇)于离心纯化柱中，10,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
5. 重复步骤4。
6. 10,000rpm再次离心1分钟，尽量除去残余异丙醇或乙醇。
7. 将离心纯化柱置于新的离心管中，开盖放置2~3分钟，使异丙醇或乙醇挥发殆尽。
一定使异丙醇或乙醇挥发干净，否则影响其回收率及纯度。
8. 加入30~50µl洗脱液或无菌超纯水，静置3~5分钟，使洗脱液充分将硅胶膜浸透。
洗脱液或超纯水的用量视用户对DNA浓度的要求而定。将洗脱液或超纯水50ºC预热对提高回收率有一定帮助，但超纯水的洗脱效率不如专门的洗脱液。
9. 10,000rpm离心2分钟，管底溶液即为所需的DNA。将DNA贮存于-20ºC可长期保存。
离心柱放入离心管中，若盖不上盖子，亦没有关系，可开盖离心。
二、从溶液中回收DNA片段
1. 往无石蜡油的PCR反应液或其它酶反应液(50～100µl)中加入3倍体积的GP结合液，颠倒混匀。然后将混和液转入离心纯化柱，静置至少5分钟, 使DNA充分与硅胶膜结合。10,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
适当增加DNA与硅胶膜结合的时间，使DNA与硅胶膜充分结合，能在一定程度上提高回收率。
2. 加入750µl的80%异丙醇(或80%乙醇)于离心纯化柱中，10,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
3. 重复步骤2。
4. 10,000rpm再次离心1分钟，尽量除去残余异丙醇或乙醇。
5. 将离心纯化柱置于新的离心管中，开盖放置2~3分钟，使异丙醇或乙醇挥发殆尽。
一定使异丙醇或乙醇挥发干净，否则影响其回收率及纯度。
6. 加入40~50µl洗脱液或无菌超纯水，静置3~5分钟，使洗脱液充分将硅胶膜浸透。
洗脱液或超纯水的用量视用户对DNA浓度的要求而定。将洗脱液或超纯水50ºC预热对提高回收率有一定帮助，但超纯水的洗脱效率不如专门的洗脱液。
7. 10,000rpm离心2分钟，管底溶液即为所需的DNA。将DNA贮存于-20ºC可长期保存。
离心柱放入离心管中，若盖不上盖子，亦没有关系，可开盖离心。
常见问题及参考意见
常见问题 | 可能原因 | 参考意见 |
| 回收率低 | 洗脱液pH<7.0 | 用洗脱液或pH>7.0的无菌超纯水洗脱 |
| 洗脱温度过低 | 加入50℃温育的无菌超纯水或TE浸透硅胶膜 | |
| 回收片段过大或过小 | 最适宜的回收片段为100bp～5Kb | |
| 对于小于100bp的小片段，增大GP结合液的比例 | ||
| 回收的DNA片段在后续实验中出现问题（例如连接失败） | 盐的浓度过高 | 用80%乙醇漂洗回收产物 |
| 增加漂洗次数 | ||
| 残留有有机试剂 | 增加离心时间，将80%乙醇或异丙醇去除干净 | |
| 部分双链DNA变性为单链DNA | 在进行后续酶反应时，加入除酶以外的其它成份，95℃加热2分钟，缓慢冷却至室温（25℃以下），使单链DNA重新退火为双链DNA，然后加入酶，继续进行酶反应 | |
| 用含有10mMNaCl的Tris Buffer洗脱DNA片段。（注意：盐的浓度可能影响后续实验） |
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温馨提示：不可用于临床治疗。
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