支原体检测试剂盒_昆虫细胞载体_载体及构建_生化试剂库_商城

货号：	chem-010A
CAS号：	/
供应商：	上海麒盟生物科技有限公司
数量：	1
英文名：	/
保质期：	两年
保存条件：	-20℃
注册证号：	/
规格：	10 Tests

【产品货号】chem-010A
【产品规格】10 tests
【保存条件】-20℃保存
【产品组成】

Components	Volume(μl)
RNase free water	100
Positive control	10
Cell lysis buffer	1000
Myco mix (primer)	15
2×Taq plus Mix Master	125

【产品说明】
支原体（Mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体。支原体的大小为0.2~0.3μm，可通过过滤器，大多数抗生素对其无效，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。对细胞的污染率高达15%~35%并且造成对免疫、代谢、生长状况、生化特性等的改变，严重影响到实验结果的可靠性、稳定性和准确性。目前检测支原体的方法有琼脂培养或肉汤、Giemsa染色法将其染成淡紫色、ELISA、直接或间接的PCR法，其中PCR法相较之下的灵敏度最高。本试剂盒利用PCR法监测细胞培养中的支原体。本试剂盒可检测Mycoplasma hyosynoviae(猪滑液支原体)、Mycoplasma orale(口腔支原体)等98%以上的细胞支原体污染。
【操作步骤】
样品的准备：细胞样品需在无抗生素的培养基上培养两周以上，待细胞密度为80%以上时可用于实验。
A 样品为细胞
1A. 收集1ml细胞悬液于1.5ml离心管中；
2A. 13000rpm离心1min，弃上清，收集沉淀；
B 样品为培养上清
1B. 收集1ml细胞培养上清于1.5ml离心管中；
2B. 13000rpm离心5min，弃上清，收集沉淀；
3. 加入500μlPBS重悬沉淀，13000rpm离心5min，弃上清，收集沉淀；
4. 加入100μl Cell lysis buffer，重悬沉淀，25℃水浴中孵育20min；
5. 将样品置于95℃水浴中加热5min；
6. 13000rpm离心5min，收集上清，作为模板进行PCR反应。
【PCR反应体系】

组分	检测样品
RNase free water	6
Myco mix (primer)	2
2×Taq plus Mix Master	10
Sample	2

Positive control反应体系与检测样品体系相同。
【PCR反应程序】
95℃            3min
95℃            20s
60℃            20s      35cycles
72℃            25s
72℃            3min
7. PCR产物使用1%琼脂糖凝胶电泳30min。紫外凝胶成像系统下检测PCR产物条带

【结果判定】

PCR模板	PCR产物	判定说明
阳性对照	有255bp和370bp条带	阳性成立
阳性对照	无或只有一条条带	阳性不成立
检测样品	有255bp和370bp条带	支原体污染
	有255bp条带	无支原体污染
	无条带	细胞量过少或PCR反应被抑制

PCR条带说明：
255bp条带为人、大鼠、小鼠同源序列条带，为内控条带
370bp条带为98%以上细胞污染支原体同源序列

温馨提示：不可用于临床治疗。

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