货号: | BW120014 |
保存条件: | -20度冻存 |
CAS号: | BW120014 |
供应商: | Biowit |
数量: | 1瓶 |
保质期: | 1年 |
规格: | 500ml |
RPMI1640完全培养基
★产品货号
BW120014
★产品内容
名称 | 规格 | 保质期 | 贮藏条件 | 运输 |
RPMI1640 | 500ml | 12个月 | 2-8℃避光保存 | 冰袋运输 |
胎牛血清(FBS) | 25ml | 60个月 | -20℃避光保存 | |
青霉素/链霉素溶液(P/S) | 5ml | 12个月 | -20℃避光保存 |
★ 使用注意事项
1.在配制完全培养基前,请把胎牛血清(FBS)、青霉素-链霉素(P/S)放到2-8℃冰箱过夜解冻。
2.在使用完全培养基前,需要把培养基放到37℃恒温水浴中预热,注意温度不要超过37℃。
3.请把配制好的完全培养基放在4℃冰箱避光保存,并尽量在一个月内使用完。避免反复冻融,若培养基要分几次使用,请将胎牛血清(FBS)、青霉素-链霉素(P/S)解冻按用量分装后保存。
★ 产品用于
仅供研究使用。不适用于人或动物体外诊断与治疗。
★ 培养条件
37℃,5% CO2,无菌恒温培养。
★ 相关操作
细胞复苏
1.把完全培养基放入37°C水浴中预热;
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续孵育细胞);
3.在超净台中加入5ml的完全培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;
4.弃上清,加入5ml的完全培养基重悬细胞,转移到T-25细胞培养瓶中(带滤芯);
5.将培养瓶置于37℃,5% CO2的无菌培养箱中培养;
6.第二天,用新鲜的完全培养基给细胞换液。
细胞传代培养
1.在显微镜下观察细胞,当细胞融合度超过80%时,即可传代培养;
2.37℃水浴预热培养基;
3.在超净台中,弃掉T-25细胞培养瓶中的培养基,加入2ml PBS清洗,再加入1ml 0.25%胰酶-EDTA消化细胞;
4.在显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,即可加入5ml完全培养基终止消化;
5.用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;
6.将细胞转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
7.弃上清,加入15-20ml的完全培养基重悬细胞后转入T-75细胞培养瓶中或按适当比例接种到T-25细胞培养瓶中(确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混匀细胞悬液,确保细胞均匀分布;
8.将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养;
9.每两天用新鲜、预热的完全培养基进行换液。
细胞冻存
细胞冻存可用百恩维的“无DMSO无动物源细胞冻存液”,具体操作如下。
1. 细胞消化和计数,用胰酶对待冻存的细胞进行消化,并对细胞进行计数;
2. 1000rpm离心5分钟,去掉上清;
3. 根据细胞计数的情况,加入适量的冻存液,使细胞密度在1×106/ml左右(或根据自己希望达到的细胞密度);
4. 轻轻地重悬细胞(务必重悬均匀),将重悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管(需提前做好标记或者贴上标签)中,旋紧冻存管盖;
5. 将冻存管放入程序降温冻存盒中,然后将冻存盒直接放入-80℃;
6. 第二天将细胞从-80℃转移到液氮中。
注:如客户用自己配制的冻存液冻存细胞,请避免用甘油作为保护剂。
温馨提示:不可用于临床治疗。