超纯RNA提取试剂盒（含DnaseI）_病毒纯化_核酸纯化_生化试剂库_商城

货号：	DY6171A
供应商：	德元国际
数量：	大量
规格：	50T

超纯RNA提取试剂盒（含DnaseI）
Ultrapure RNA Kit
Cat No：DY6171A
Kit Size:50T

产品组分
		组分 Contents	50T
		DNase I	1000U
		10×Reaction Buffer	1ml
		Buffer 1 #	60ml
		Buffer 2 #	40ml
		Buffer 3 #（concentrate）	11ml
		Buffer 4 #	10ml
		吸附柱	50个
		收集管	50个
		离心管	50个

储运条件
	本试剂盒中DNase I、10×Reaction Buffer：-20 ℃,Buffer 1 #保存在2-8℃，其余组化室温（15-25℃）干燥条件下保存。保质期一年
说明
	本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
产品简介
	本试剂盒是北京德元国际科技有限公司改进后的柱式总RNA提取试剂盒，裂解液充分裂解并匀质化样本，采用独特的硅基质膜吸附技术，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA，同时最大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等；可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA，每次可处理30-50 mg组织或5×106细胞，可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
实验前准备及注意事项
	1. 本实验需要无水乙醇、LVFANG、异丙醇等请自备。
	2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
	3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min，用水彻底冲洗后高压灭菌。
	4. 配制溶液应使用无RNase的水。
	5. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

6. 提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。

7. 使用前若发现Buffer 1 #有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。

8. 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer 3 #中加入无水乙醇。

9. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

10. 若下游实验对 DNA 非常敏感，建议用不含 RNase 的 DNaseI（货号：DY6060）对 RNA 进行处理。

操作步骤

1.样品处理：

1）组织：30-50 mg组织在液氮中充分研磨后加入1 ml Buffer 1 #，或在组织样品中加入1 ml Buffer 1 #后匀浆处理.样品体积不超过Buffer 1#体积的10%。

2) 单层培养细胞：吸去培养液，加入适量Buffer 1 #，每10 cm2 加入1 ml Buffer 1 #。

3) 细胞悬液：离心收集细胞。每5×106细胞加入1 ml Buffer 1 #。

2.将匀浆样品反复吹打几次，在室温条件下静置5min，使蛋白核酸复合物完全分离。

3.向以上溶液中加入LVFANG，每使用1mlBuffer 1 #加入0.2ml LVFANG，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3min。

4. 4℃ 12,000 rpm离心10min，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在水相中，把水相（约600μl）转移到一个新的离心管（自备）中。

5.在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇（无RNase水配制），颠倒混匀。

6. 将上步所得溶液全部加入到吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rmp离心20s,倒掉收集管中的溶液，将吸附柱重新装入收集管中。

7．向吸附柱中加入350 μl Buffer 2#，12,000 rpm离心20s，倒掉收集管中的废液，

8. 配制DNase I 混合液：取52 μl Buffer 4 #，向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer 和20 μl DNase I（1 U/μl），混匀，配制成终体积为80 μl的反应液。

9. 向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液，20-30℃孵育15min。

10.向吸附柱中加入350 μl Buffer2#, 10,000 rpm离心1min，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。

11．向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心20s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

12.重复步骤11

	13．12,000rpm离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应（酶切、PCR等）。
	14. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50 μl Buffer 4 #，室温放置1min，12,000 rpm离心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。注意：1）Buffer 4 #体积不应小于30 μl，体积过小影响回收率。 2）如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的Buffer 4 #重复步骤14 3）如果要提高RNA浓度，可将所得溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤14。

温馨提示：不可用于临床治疗。

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