动物组织总RNA提取试剂盒

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单价: 880.00
品牌: DORUN
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更新: 2021-07-26
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货号: DY6173
供应商: 德元国际
数量: 大量
规格: 50T
动物组织总RNA提取试剂盒
RNApure Tissue Kit
Cat No:DY6173
    Kit Size:50T  
                 
                 
产品组分              
    组分 Contents     50T    
    Buffer 1 #     35ml    
    Buffer 2 #     40ml    
    Buffer 3 #(concentrate)   11ml    
    Buffer 4 #     10ml    
    吸附柱       50个    
    收集管       50个    
    离心管       50个    
                 
                 
                 
储运条件              
    本试剂盒室温(15-25℃)干燥条件下保存。保质期一年
说    明              
   本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。    
产品简介              
     本试剂盒将高效的异硫氰酸胍裂解技术与硅基质膜纯化技术相结合,可从动物细胞及组织中高效提取总 RNA。提取样本一般最多 30 mg 组织或 1 x 107 细胞。
   本试剂盒可回收未完全纯化的 RNA、体外转录和酶促反应后得到的 RNA。
   本试剂盒也可提取纯化分子量大于 200 碱基的高品质 RNA,几乎无DNA 残
留。如果要进行对微量 DNA 非常敏感的 RNA 实验,残留的 DNA 可利用无 RNase 的 DNase I 在柱上进行消化去除。提取的 RNA 可用于 RT-PCR、Nothern Blot、Dot Blot等下游实验。 
实验前准备及注意事项            
  1. 本实验需要无水乙醇、β-巯基乙醇等请自备。      
  2. 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。    
  3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h,塑料器皿可在0.5MNaOH中浸
   泡10min,用水彻底冲洗后高压灭菌。
  4. 配制溶液应使用无RNase的水。        
  5. 提取的样品避免反复冻融,否则影响miRNA提取得率和质量。
  6. 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer 3 #中加入无水乙醇。
  7. 使用前请检查 Buffer 1# 是否出现结晶或者沉淀,可置于 56℃加热重新
   溶液。Buffer1#在使用前请加入β-巯基乙醇,至终浓度为 1%。如 1ml
   Buffer 1# 加 10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的 Buffer 13室温
   可保存 1 个月。
  8. 若下游实验对 DNA 非常敏感,建议用不含 RNase 的 DNase I(货号:
   DY6060)对 RNA 进行处理。
  9. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
   
操作步骤              
  1. 样品处理
   1)组织:将组织在液氮中磨碎。每20-30 mg组织加600 μl Buffer 1#使用
      前检查是否加入β-巯基乙醇),组织样本少于20 mg加350 μl Buffer 
      1#。样品体积不超过Buffer 1#体积的十分之一。 
     2)单层培养细胞:将细胞在培养瓶中直接裂解或处理成细胞悬液,离心得 
      到细胞沉淀,弃上清,每6-10 cm2 培养面积加入600 μl Buffer1#,
      小于6 cm2加入350 μl Buffer 1#,反复吹打几次,使其充分裂解。 
     3)细胞悬液:12,000 rpm(~13,400×g)离心1分钟弃上清,得到细胞沉
      淀。每5×106-1×107细胞加入600 μl Buffer 1#,少于5×106细胞加
      入350 μl Buffer 1#,反复吹打几次,使其充分裂解。
   注意:(1)尽量除尽细胞培养基,细胞培养基可能抑制细胞的裂解影响RNA
            产量。
         (2)尽量使细胞充分悬浮并充分裂解,否则影响RNA产量。
  2. 样品充分裂解后,室温放置5min,使蛋白核酸复合物完全分离。
  3. 12000rpm离心2-5min,取上清进行下步操作。 
  4. 加入1倍体积(600 μl或350 μl)的70%乙醇(无RNase水配制),混匀。
  注意:加入乙醇后可能会产生沉淀,不会影响后续实验。   
  5. 将上步所得溶液全部加入到吸附柱(吸附柱应预先装入收集管中)中,若
   一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rmp离心1min,倒掉收集管中的溶
   液,将吸附柱重新装入收集管中。
 注意:吸附柱的最大载量为100 µg不要超载,否则会影响RNA的产量和纯度。
  6. 向吸附柱中加入700 μl Buffer 2#, 12,000 rpm离心1min,倒掉收集管
    中的废液,将吸附柱放回收集管中。
  可选步骤:如果要进行对微量DNA非常敏感的RNA实验,则用以下步骤替代步    骤6。
          1)向吸附柱中加入350 μl Buffer 2#, 10,000 rpm离心15s,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
           2)配制DNase I 混合液:取52 μl Buffer 4 #,向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer 和20 μl DNase I(1 U/μl),混匀,配制成终体积为80 μl 的DNase I混合液。
   注意: 以上体系为按照德元国际公司产品DNase I (DY6060)反应体系进行配置,应用其他公司产品请参考相应说明书。
         3)向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液,20-30℃孵育15min。
         4)向吸附柱中加入350 μl Buffer 2#, 10,000 rpm离心15s,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。 
  7.   向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#(使用前检查是否加入无水乙醇),
     12,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 
  8. 重复步骤7。 
  9.12,000rpm离心2min,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,彻底
    晾干。注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后
    续酶促反应(酶切、PCR等)。
  10. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50
    μl Buffer 4 #,室温放置1min,12,000 rpm离心1min,收集RNA溶液,
    -70℃保存RNA,防止降解。
  注意:1)RNase-Free Wate体积不应小于30 μl,体积过小影响回收率。
        2)如果要提高RNA的产量,可用30-50 μl新的Buffer 4 #重复步骤10
        3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸到吸附柱中,
           重复步骤10。
温馨提示:不可用于临床治疗。