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| 货号： | TR2003 |
| 供应商： | 上海研谨生物 |
| 数量： | 大量供应 |
| 规格： | 100ml/瓶 |
产品编号：TR2003
产品名称：总RNA提取试剂（TRICzol）
产品规格：100ml/瓶
产品价格：￥260.00元
TRICzol使用说明书
编 号：TR2003
规 格：100ml红色透明液体
储存条件：2-8℃避光保存12个月
一、分离纯化的基本原理：
Trizol试剂是可即用的从动物、植物细胞和组织或微生物中提取总RNA的试剂。在样品裂解或匀浆过程中，Trizol可溶解细胞内含物，同时具有使蛋白变性、抑制RNase活性的作用，保持RNA的完整性。可以从富含多糖、脂肪酸、蛋白质及RNase的样品中获得完整的RNA。
经过Trizol试剂处理后的裂解物，仅仅只需加入氯仿混匀，离心后，便分为三种液相：上层水相含有RNA，中层的半固体相含有DNA，下层的有机相含有少量的DNA和大量的蛋白质、多糖、脂肪酸和其它细胞碎片。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA，一般所得RNA溶于DEPC
水后的A260/280值为1.6-1.8。
二、用户需自备的试剂和材料：
无水乙醇(预冷)、氯仿(预冷)、异丙醇(预冷)、75%乙醇(预冷)、无RNase的水和DEPC
水。1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、Tips（RNase-free）
三、预防RNase污染注意事项：
- 所有离心管、枪头及相关溶液都必需无 RNA酶污染。耐高温器物可170℃烘烤5小时以除去RNA酶，其它器物除RNA酶可考虑用0. 1%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌、烘干。溶液需用灭菌的DEPC水配制：加0. 1%(体积比)DEPC至双蒸水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水。
- 必需戴一次性手套及口罩操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。
四、操作步骤：
- 匀浆处理： a. 组织：先将组织剪切成小块，放入普通玻璃匀浆器内，或者用液氮研磨组织样品。每
50mg-80mg组织加入1ml Trizol，匀浆。 b. 贴壁细胞：吸尽培养液，按照每10cm2细胞加入1ml Trizol，震荡混匀，确保全部裂解，然后吸至离心管中。
c. 细胞悬液：离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml Trizol，震荡混匀。加Trizol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
- 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5-15分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。待溶液成均一态（Trizol 溶胞液）时即可进行下一步实验，或放入-70℃长期保存。
- 每使用1ml Trizol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
- 2-8℃10000转，离心15分钟，把水相转移到新管中。
- 用异丙醇沉淀水相中的RNA，每使用1ml Trizol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
- 2-8℃10000转，离心10分钟，在管底可见RNA沉淀，弃上清。
- 用1ml 75℅乙醇洗涤RNA沉淀，2-8℃不超过7500转，离心5分钟，弃上清。
- 待RNA略干后，加入20微升DEPC水溶解，55-60℃放置10分钟使RNA溶解，立即进行逆转录反应或-70℃冻存。注意，切勿让RNA过分干燥，否则将极难溶解，且测出的A260/A280值会低于1.6。
五、注意事项：
- 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60℃至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75%酒精中2-8℃一星期以上或-5℃至-20℃一年以上。
- 样品体积不应超过Trizol体积10℅，Trizol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
- Trizol含有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，忌用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤程度。如仍有不适，请听取医生意见。
- 如果细胞数过少或组织块过小，RNA 将难以沉淀。可向Trizol溶胞液中加入适量酵母tRNA（每毫升Trizol溶胞液可加入2μl ，10μg/μl酵母tRNA）作为共沉淀剂。
- 操作快速、低温和尽量避免微生物和RNase的污染，是保证实验成功的关键。
六、预期产量：
1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为： 肝和脾6-10µg ，肾3-4µg ，骨骼肌和脑组织
1-1.5µg ，胎盘1-4µg ，上皮细胞8-15µg ，成纤维细胞5-7µg 。
七、常见问题分析：
- 得率低：
A. 样品裂解或匀浆处理不彻底
B. RNA沉淀未完全溶解(A260/A280<1.65) ：
①．检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高②．样品匀浆时加的试剂量太少③．匀浆样品时未在室温放置5分钟④．吸取水相时混入了有机相⑤．RNA沉淀未完全溶解
- RNA降解：
A. 组织取出后没有马上处理或冷冻 B. 待提取RNA的样品没有保存于-60℃至-70℃而保存在了-5℃至-20℃ C. 细胞在用胰酶处理时过度 D. 溶液或离心管未经RNase去除处理
- DNA污染：
A. 样品匀浆时加的试剂量太少 B. 样品中含有有机溶剂(如乙醇、DMSO等)
温馨提示：不可用于临床治疗。
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