阶段一通过免疫接种程序，免疫5只 Balb/c小鼠。用ELISA测定血清滴度。大约需要3-4mg 蛋白抗原或2mg偶联多肽抗原和0.5mg未偶联多肽。当血清中抗体滴度达到合适值，利用小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，以生成需要的杂交瘤,对杂交瘤细胞进行ELISA，从中筛选出阳性的母克隆细胞株。阶段二对ELISA检测阳性的杂交瘤做有限稀释，对亚克隆细胞做ELISA检测，筛选出5个适合做ELISA检测的单克隆抗体杂交瘤细胞株。对筛选出的杂交瘤中的单克隆抗体进行亚类鉴定。选项一从母克隆杂交瘤中筛选出WESTERN BLOTTING阳性的细胞株，做有限稀释，从中再筛选出WESTERN BLOTTING结果强阳性的亚克隆细胞株。选项二对上述ELISA和WESTERN BLOT检测确定的阳性杂交瘤做Immunocytochemistry检测，筛选出适合做ICC检测的杂交瘤细胞株 。选项三从阶段二中筛选出的杂交瘤中，做Immunohistochemistry检测，从中筛选出适合做IHC的杂交瘤细胞株。选项四从阶段二中筛选出的杂交瘤中，做Flow cytometry检测，从中筛选出适合做Flow cytometry的杂交瘤细胞株。选项五从融合的母克隆ELISA阳性的细胞中，用天然蛋白做Immunoprecipitation检测，从中筛选出能产生和天然结构蛋白结合的单克隆抗体。对抗体亲和力进行测定。选项六通过腹水或高密度无血清培养大量生产单克隆抗体。选项七用A蛋白或G蛋白纯化抗体。选项八将纯化的抗体偶联到层析拄上，做天然蛋白通过抗体偶联层析柱回收效率检测，筛选出能用来纯化目的蛋白的杂交瘤细胞株。附加选项抗体生物素偶联多肽合成与KLH偶联多肽
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