慢病毒相关服务_病毒转染系统_分子生物学服务_技术服务库_商城

我们将采取分步收费的方式，即按照所提供的构建，重组，包装，扩增及纯化的一系列不同的服务，根据客户的实际需要，对每项服务进行具体的核算。客户如需检测其目的基因表达所需费用另行核算。如需要筛选稳定细胞株的客户需选择符合自己需要的细胞株（可以自行提供）

服务项目	周期(天)	参考报价
构建	14	询价
1.合成基因(可选，费用另算) 2.根据客户需求，克隆至表达载体
转染和插入基因检测	7	询价
1.转染至100mm孔或者6孔板和蛋白表达WB检测
病毒包装	30-40	询价
1.细胞培养 2.转染 3.原代病毒收集
病毒纯化	2	询价
1.超速离心
QC	30	询价
1. qPCR滴度检测 2.插入基因PCR鉴定 3.RCA检测(可选)

三、交付结果：◆ 插入慢病毒载体中目的基因的测序报告◆ 提供构建好的慢病毒载体质粒（4ug），并附上酶切或PCR鉴定结果◆ 对于需要获得病毒的客户，我们将提供1ml 含10⁶-10⁷病毒的浓缩后病毒液，并附上一份QC报告◆ 对于需要通过慢病毒获得稳定细胞株的客户，我们将提供10⁶数量的细胞，并附上一份QC报告

慢病毒(Lentivirus)介导的siRNA活体实验用病毒转染服务

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。

本公司使用的慢病毒表达系统，它由三部分组成：

慢病毒表达载体

慢病毒包装质粒

可产生假病毒颗粒的细胞系

服务流程

根据目的基因相关信息（序列，序列号等），利用高效的设计软件，设计 siRNA序列，针对每条目的基因，我们设计3条siRNA序列，其中1条序列为阴性对照组；

根据设计好的 siRNA序列，设计，合成两条互补的短片段的DNA；

对合成好的 DNA片段进行稀释，退火，连接到线形化处理过的载体，转化，涂平板，过夜培养；

通过 PCR的方法筛选阳性菌落，进行测序，分析测序结果；

对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒；

利用构建好的质粒做转染实验， 48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因，筛选出一条最有效的siRNA序列；

筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；