脂肪酶测定试剂盒_酯酶_酶_生化试剂库_商城

产品内容：

试剂一：液体80mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，室温保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。

标准品：0.06mL×1支。临用前加入1.5 mL无水乙醇，充分溶解配制成125 μmol/mL的油酸标准溶液，4℃保存。用前注意解冻溶解。

产品说明：

LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

自备仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、甲***、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

组织样品：称取约0.1g样品，加试剂一1.0 mL充分研磨，于4℃，15000rpm离心30min，取上清液待测。

血清样品：直接检测。

二、测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲***调零。

2、试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。

3、标准溶液的稀释：将125 μmol/mL的油酸标准溶液稀释为125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9 μmol/mL的标准溶液待测。

4、操作表：

mL		空白管	测定管		标准管
试剂一		0.375	0.375		0.375
试剂二		0.125	0.125		0.125
反复震荡混匀
蒸馏水		0.2
上清液/血清			0.2
标准溶液					0.2
迅速震荡混匀后置于37℃水浴准确反应10 min
甲***		1	1		1
反复震荡混匀后，室温4000rpm离心10 min
取出离心管，小心吸取上层溶液0.9 mL，加入另一2 mL塑料离心管中，按下表操作：
加入试剂（mL）	空白管			测定管		标准管
试剂三	0.225			0.225		0.225

反复震荡混匀；室温4000rpm离心10 min，小心吸取上层溶液800 μL，加入1mL玻璃比色皿，于710nm处测定吸光值。记为A空白管，A测定管，A标准管，计算ΔA测定= A测定管-A空白管，ΔA标准= A标准管-A空白管。

三、LPS活性计算：

1、标准曲线的绘制：以油酸标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b。将ΔA测定带入方程，得到x（μmol/mL）

2、酶活计算：

（1）按蛋白浓度计算：

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mg prot) =x×V样÷（Cpr×V样) ÷T= 0.1×x÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/g 鲜重) =x×V样÷（W×V样÷V提) ÷T= 0.1×x÷W

（3）按血清计算：

活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mL 血清) =x÷T= 0.1×x。

V样：加入反应体系中上清液体积，0.2 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；T：催化反应时间，10 min。W：样本鲜重，g；V提：提取液体积，1mL。

注意事项：

1、甲***有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、实验过程中须远离火源。

3、当吸光度大于1时，建议将样本稀释后测量。

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