谷草转氨酶测定试剂盒

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更新: 2024-03-29
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产品内容:

提取液:液体30mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体8 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:液体8mL×1瓶, 4℃保存;

试剂三:液体80 mL×1瓶,4℃保存;

标准品:液体1mL×1支,20μmol/mL丙***酸钠标准品,4保存。

产品说明:

GOT 2.6.1.1广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT在心肌细胞中含量最高,临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。

GOT催化 α-***戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙***酸;丙***酸可与2,4-二*****肼反应生成2,4-二*****腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。

实验需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品测定的准备 

1、 细胞或微生物样品的制备 :

先收集细胞或微生物样品到离心管内,弃上清,按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次)。3500g4离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:

称取约0.1g组织,加入1mL提取液进冰浴行匀浆。3500g  4离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

二、测定操作表

1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。

2、 标准曲线的测定

首先将标准品稀释至20μmol/mL,按下表 混合标准品和试剂一得到相应浓度标准管:

标准品(μL

试剂一(μL

标准管浓度(μmol/mL

120

0

2

90

30

1.5

60

60

1

45

75

0.8

24

96

0.4

12

108

0.2

6

114

0.1

3

117

0.05

0

120

0

3、在EP管中加入下列试剂

试剂名称(μL

测定管

对照管

标准管

待测样本

20

 

 

试剂一  

100

100

 

标准液

 

 

120

混匀后,37(哺乳动物)或25(其它物种)预热30min

试剂二

100

100

100

待测样本

 

20

 

混匀后,37(哺乳动物)或25(其它物种)准确水浴20min

试剂三

1000

1000

1000

混匀,室温放置10min,在505nm波长处,测各管吸光度。

注:0μmol/mL 标准管为空白管。

三、计算

1、 标准曲线的绘制:

以各标准溶液浓度为x轴,以∆AA标准管-A空白管)为y轴做标准曲线,得到方程y=kχ+b。将(A测定管-A对照管)带入方程求x值。

2、 GOT活性计算:

1)按样本鲜重计算:

单位定义:每小时每g鲜重样品催化产生1μmol丙***酸的量为一个GOT活力单位。

GOTU/g鲜重)=x×V样本+V试剂一)÷W×V样本÷V样总)÷T=12x÷W

2)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙***酸的量为一个GOT活力单位。

GOTU/mg prot=x×V样本+V试剂一)÷Cpr×V样本)÷T=12x÷Cpr

3)按血清体积计算:

单位定义:每小时每mL血清样品催化产生1μmol丙***酸的量为一个GOT活力单位。

GOTU/mL=x×V样本+V试剂一)÷V样本÷T=12x

4)按细胞数量计算:

单位定义:每小时每104个细胞样品催化产生1μmol丙***酸的量为一个GOT活力单位。

GOTU/104 cell=x×V样本+V试剂一)÷V样本÷V样总×500÷T=0.024x

V样本:吸取样本体积,0.02mLV试剂一:吸取试剂一体积,0.1mLV样总:吸取提取液体积,1mLW:样本鲜重,gCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLT:反应时间,0.5h500:细胞个数,以万计