生物素分子纯化预装柱,5ML

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单价: 1158.00
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更新: 2020-06-15
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BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML

生物素分子纯化预装柱,5ML

产品信息

产品名称          

产品编号

规格

储存

价格(元)

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML

生物素分子纯化预装柱,5ML

20514ES08

5ml

4

1158.00

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML

生物素分子纯化预装柱,5ML

20514ES25

5×5ml

4

4958.00

产品描述

Streptavidin Agarose Resin 6FF是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂,其作用原理是基于链霉亲和素与生物之间的相互作用,将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上,独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。

由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强,纯化时需要在变性条件下洗脱;而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱,可以在 pH9.5-11.0 结合,pH4.0 时洗脱,不需要使用变性剂,所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML是装填了Streptavidin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱,规格5ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

产品性质

基质(Matrix

高度交联的6%琼脂糖微球

配体(Ligand

链霉亲和素

孔径(Bead size

45-165µm

载量(Capacity

200nmol Biotin/ml 介质

最大压力(PressureMax

0.3 MPa, 3bar

pH稳定范围(pH range

2-10

储存缓冲液(Buffer

20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4保存,有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤除菌。

生物素或生物素化物质的纯化

结合/洗杂缓冲液:150mM NaCl, 20mM NaH2PO4, pH7.4

洗脱缓冲液:8M 盐酸胍,pH1.5

亚氨基生物素标签物质的纯化

结合/洗杂缓冲液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl, pH10.0

洗脱缓冲液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl, pH4.0

 

 

 

使用方法

【注】样品在上样前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。另外,确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1样品纯化(以Akta为例)

1准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1-5ml/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。

6洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3 填料清洗

随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。

1)去除一些沉淀或变形物质

2倍柱体积的0.1M NaOH6M盐酸胍或8M尿素溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。

2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。

注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

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