FlashPfu DNA聚合酶

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单价: 990.00
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更新: 2021-07-26
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产品名称FlashPfu DNA 聚合酶

英文名称FlashPfu DNA Polymerase

产品规格

产品编号

产品规格

产品价格

TB10011A

100 U

¥990

TB10011B

250U

¥1690

产品描述FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通过融合特殊持进能力增强因子与精心改造过的pfu DNA聚合酶,是来源于超嗜热古细菌的DNA聚合酶。该酶具有5→3 聚合酶活力, 3→5 核酸外切酶活力,并产生平头末端产物。由于其具有高效的3→5 核酸外切酶活力(校正活力),使得PCR能获得很好的保真性,FlashPfu DNA聚合酶的错配率约为Taq DNA聚合酶的1/50。FlashPfu DNA聚合酶的最快延伸速率可达5−6 kb/min,对于复杂模板也可达到2 kb/min。

特点与应用

1、高保真PCR——保真性为Taq DNA聚合酶的50倍

2、快速PCR——延伸速度15−30 s/kb

3、长片段PCR——基因组DNA ≤ 19 kb,λ DNA ≤ 30kb

4、生成用于平头末端克隆的PCR产物

5、定点突变

活力单位定义75°C、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为1个活性单位(U)。

储存条件:储存于-20℃。

注意事项

1、请等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)完全溶解后再配制PCR反应体系。

2、为了获得最佳的扩增效果,扩增前的所有操作请在冰上进行。在室温下,聚合酶活力可能会产生非特异性扩增。并且请将FlashPfu DNA Polymerase最后加入反应体系,以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力导致引物降解。

3、本产品扩增产物的克隆请按照平头末端克隆方法操作。

4、引物设计:

1)引物Tm值计算请使用最邻近法(Nearest Neighbor method)。请不要使用其他计算方法,它们计算得到的Tm值偏低,不适合本产品。

2)引物长度控制在20−35碱基,并且Tm > 60°C。

3)引物的GC含量最好控制在40−60%。

4)在引物3’端以G或C结尾,可提高引物和模板结合效率。但是要避免3’端避免有多个G或C,防止非特异性结合。

5)正、反引物的Tm之差不要大于5°C。

6)正、反向引物的3’端避免相互互补。

7)扩增长片段时,引物长度控制在25−35碱基。

8)进行定点突变时,请将错配碱基靠近5’端。若错配碱基靠近3’端,可能会受本酶校正。

不要使用含有尿嘧***和次黄嘌呤核苷的引物。

应用举例:对于复杂模板的极限延伸速度

案例结果电泳图: