大鼠盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型

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更新: 2021-05-25
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提供商: 武汉云克隆诊断试剂研究所
服务名称: 大鼠盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型
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大鼠盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型

脓毒症(sepsis)是指由感染引起的全身炎症反应综合征(Systemic inflammatoy response syndrome,SIRS),临床上证实有致病菌侵袭存在或有高度可疑的感染性病灶,临床中多以常见并发症出现在重度感染、大面积烧伤、严重创伤或大手术术后的危重患者当中。脓毒症一旦发生,进展迅速,短时间可由全身炎性反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、脓毒症进展为重度脓毒症(severe sepsis)(合并器官功能不全)、脓毒症休克(septic shock)(并发充分液体复苏亦无法纠正的低血压)及多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS),以上三者可贯序发生,亦可同时发生,严重危及患者生命,产生极高的致死风险。虽然目前已经有许多动物模型用来复制脓毒症,但盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症的啮齿动物模型仍然是目前应用最广泛的脓毒症动物模型。

1.实验动物
SPF级Wistar大鼠,健康,雄性,体重为180g~200g。

2.实验分组
实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组,每组15只动物。

3.实验周期
2d

4.建模方法 
1.称量大鼠,腹腔注射水合氯醛(350mg/kg)麻醉,腹部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。
2.沿腹白线切开腹腔约2cm,找出盲肠,用 5-0 缝线结扎约1/3盲肠,以21G针头贯通穿刺结扎的盲肠2次。轻轻挤压使少量肠内容物从穿刺孔溢出确保通畅;将处理好的盲肠回纳入腹腔,用 5-0 缝线缝合内层,3-0缝线缝合外层,将大鼠置于加热垫维持肛温在37±0.5℃。
3.待大鼠苏醒后自由饮水,正常饲养。
4.2d后大鼠水合氯醛钠麻醉后,于腹主动脉取血5ml,室温静止2h, 4℃离心机3000r/min离心10min,分离出上层血清,置-80℃冰箱保存备用。处死大鼠,取出心脏、肝脏、肾脏、肺、小肠,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片(厚4um),HE染色,观察病理改变,其余组织置于-80℃冰箱备用。

5.模型的评价
1.一般情况观察
脓毒症组术后苏醒延迟,醒后精神萎靡,身体蜷缩,基本不活动,进食进水减少,对外界反应迟钝,呼吸频率加快,被毛蓬松少光泽,大便稀软,不再扎堆取暖。12h出现死亡大鼠,随着时间的延长大部分大鼠出现皮温低,肌力减弱,眼周血性分泌物,停止进食进水,排泄稀水样便,色黄,腥臭味。进一步发展出现呼吸急促,对被动仰卧无反抗,排泄物呈黏液状,量多,最终死亡。剖腹可见恶臭味血性渗液,肠管水肿黏连,盲肠坏死变黑。
2.组织病理学变化
心脏:光镜下结果比较,对照组大鼠心肌肌纤维结构排列紧密、 无水肿、充血及渗出。 模型组心肌肌纤维结构排列疏松,带状空泡化,细胞核肿胀,间质水肿、充血。 
肝脏肝有大量空泡脂肪样变性,肝细胞肿胀并有炎性细胞浸润。 肺组织毛细血管充血。
肺:模型组肺间隔增厚,部分肺泡组织结构被破坏,炎症细胞浸润。
肾:可见肾皮质及间质水肿伴大量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞均有肿胀。空泡变性,坏死脱落,。肾小管囊腔扩张、管型形成。皮髓质境界欠清晰,肾小球收缩、毛细血管微血栓形成
小肠:模型组小肠粘膜水肿、白细胞浸润、出血和上皮细胞坏死脱落。
3.细胞因子的变化:
血浆中炎症因子增加是脓毒症的典型特征之一,IL-1β、TNF-α及IL-6 是主要的促炎症细胞因子,在脓毒症模型后显著升高。

图1 术后24h死亡的大鼠盲肠解剖图,结扎段盲肠发黑坏死明显。

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