我的TRAF3片段大小1800左右，连T载后单菌落检测，用自身引物检多条带，但也有我要的条带，然后用M13检，有单一条带，但明显小于1800bp。（下图为三个单克隆的自身引物检及M13检，一个单克隆的两个检测埃一块儿）送测结果和我原来的序列只有百分之三十几的相似，在BLAST上比对显示是“大肠杆菌菌株DH5a染色体，完整的基因组”。请问这种情况能说明是哪一步出现问题了吗？用于连接转化的胶回收产物没有问题，检测是单一条带并且很亮，用量是0.5微升（1～4微升也都试过了）。请各位大神帮我看看