细菌鞭毛缺失的原因

楼主  收藏   举报   帖子创建时间:  2018-02-28 10:44 回复:10 关注量:197

 

大家好,我是一名研二学生,想咨询一下关于鞭毛染色或者鞭毛相关的问题。现在我有一株沙门氏菌菌电镜观察无鞭毛,课题想做的就是鞭毛没法正常组装的原因。提取胞外蛋白,打质谱情况来看,鞭毛丝和鞭毛钩蛋白都没有分泌出来(暂时不确定胞内表达是否正常,正在过表达验证),基因和启动子无突变,现在想了解class 2调控的基体是否正常组装,我想知道有没有针对HBB染色的,便于知道HBB有没有组装,以进行下一步实验。不知道各位老师可否赐教,万分感谢。为了能够及时联系,我的微信号是************,期待您的回复。    

 

  • blowapc 2018-02-28 14:09
    #1

    要多确认,在样品处理过程中,可能鞭毛会丢失

  • Ellian_Song 2018-02-28 17:49
    #2

    blowapc

    要多确认,在样品处理过程中,可能鞭毛会丢失


    没有任何处理,直接用LB摇菌,不经离心等处理,直接染色,已经做过三次电镜

  • Ellian_Song 2018-02-28 17:51
    #3

    Ellian_Song

    没有任何处理,直接用LB摇菌,不经离心等处理,直接染色,已经做过三次电镜

    剧烈振动后再提取分泌蛋白,如果有脱落应该有鞭毛蛋白,SDS-PAGE结果以及质谱结果,相关结构蛋白都没有

  • Ellian_Song 2018-02-28 17:52
    #4

    Ellian_Song

    没有任何处理,直接用LB摇菌,不经离心等处理,直接染色,已经做过三次电镜

    有拿几株标准菌同时做对照组

  • blowapc 2018-03-03 16:55
    #5

    建议首先确定胞内是否表达,做一个westernblot即可

  • Ellian_Song 2018-03-05 05:21
    #6

    blowapc

    建议首先确定胞内是否表达,做一个westernblot即可


    买了abcam公司的anti-flic抗体,没法用,文献上找到的抗体停产了,或者是国外的,特别贵

  • blowapc 2018-03-05 22:10
    #7

    Ellian_Song

    买了abcam公司的anti-flic抗体,没法用,文献上找到的抗体停产了,或者是国外的,特别贵

    自己做抗体就行,多肽抗体2周交货,非常快

  • Ellian_Song 2018-03-07 00:41
    #8

    blowapc

    自己做抗体就行,多肽抗体2周交货,非常快


    不知道TTSS分泌系统和鞭毛分泌系统,前者是后者的基础上进化来的么?也有说同属于一个祖先

  • blowapc 2018-03-09 13:00
    #9

    Ellian_Song

    不知道TTSS分泌系统和鞭毛分泌系统,前者是后者的基础上进化来的么?也有说同属于一个祖先

    有这种说法,也有鞭毛蛋白走ttss出来的

  • tgedff 2018-03-15 17:30
    #10

    我们做过很多的细胞自……