求助养脂肪干细胞的大神

楼主  收藏   举报   帖子创建时间:  2018-01-22 22:15 回复:14 关注量:165

我最近在养脂肪干细胞,按照文献说的取到脂肪(吸脂和皮下脂肪都有)剪成乳糜状,用PBS冲洗后,等体积1mg/mlI型胶原酶消化40min,等体积含10%胎牛血清培养基终止消化,800g离心5min,弃上清液,培养基重悬后,移入60mm培养皿培养。但是如此反复数次,得到的每次都如图,图为培养6天X200显微镜下的样子,可以看见有细胞,但是不是梭形细胞。想求助各位养脂肪干细胞的大神给看看,这到底是什么,多谢!!!

 

  • yanyan517032 2018-01-23 09:01
    #1

    你这个没提出来,步骤倒是没问题。我用的类似步骤,贴壁6小时就能看到干细胞。

  • 鸢尾祭 2018-01-23 10:05
    #2

    yanyan517032
    你这个没提出来,步骤倒是没问题。我用的类似步骤,贴壁6小时就能看到干细胞。

    是因为消化的时间不够吗?

  • yanyan517032 2018-01-23 10:33
    #3

    有可能,我一般消化时每10分钟吹打一次,直至完全消化。组织块弄大一点,不必剪太碎,更容易判断消化效果。消化液可以加多点,也不要拘泥于具体消化时间。

  • 鸢尾祭 2018-01-23 12:24
    #4

    yanyan517032
    有可能,我一般消化时每10分钟吹打一次,直至完全消化。组织块弄大一点,不必剪太碎,更容易判断消化效果。消化液可以加多点,也不要拘泥于具体消化时间。

    请问你有消化好以后的照片吗?可以给我看看吗?没有离心之前的

  • yanyan517032 2018-01-23 12:27
    #5

    鸢尾祭

    请问你有消化好以后的照片吗?可以给我看看吗?没有离心之前的

    我之前没留过照片,下次分离细胞时拍照发给您。

  • 鸢尾祭 2018-01-23 17:04
    #6

    yanyan517032

    我之前没留过照片,下次分离细胞时拍照发给您。

    谢谢了~

  • yanyan517032 2018-01-24 20:37
    #7

    鸢尾祭

    谢谢了~

    这是消化好离心前的照片


  • yanyan517032 2018-01-24 20:38
    #8

    下面一张是过滤并离心后的照片。

  • dxy_doi1oybr 2018-03-13 11:05
    #9

    yanyan517032
    你这个没提出来,步骤倒是没问题。我用的类似步骤,贴壁6小时就能看到干细胞。

    6小时就贴壁了,好快 你用的培养基是DMEM/F12低糖的么(含10%FBS),另,FBS是用的GIBCO进口的血清么,望帮助

  • yanyan517032 2018-03-13 12:14
    #10

    dxy_doi1oybr

    6小时就贴壁了,好快 你用的培养基是DMEM/F12低糖的么(含10%FBS),另,FBS是用的GIBCO进口的血清么,望帮助

    培养基是的,血清不太记得了,中途也换过血清,影响不大。