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【求助】天然蛋白提取时加入尿素 的目的... 已解决
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【求助】天然蛋白提取时加入尿素 的目的
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2005-10-27 12:29
据我所知尿素的作用就是降低了蛋白质的活度系数使其溶解，当然要求是低浓度的，要是浓度高了就产生负面影响。适当浓度尿素是不会使蛋白变性的，所以放心使用了。
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2005-10-28 17:30
尿素的作用可溶解蛋白质,有些文献中用8M的浓度(配置溶液时需要加热才能溶解尿素). 溶解后可能会变性,需要复性.
我的蛋白复性的过程于下: (1)将蛋白溶液放入低吸附试管内，缓慢滴加等体积的PBS,轻摇混匀，置冰上30min(此时尿素浓度降至4M)； （2） 将溶液转入透析袋中， 然后将透析袋浸于透析液（3M Urea、2mM GSH 、0.2mM GSSG、 PBS pH7.4）中，4℃搅拌透析过夜； （3）次日将透析液更换为（2M Urea、2mM GSH、0.2mM GSSG、PBS pH 7.4），并缓慢向透析杯中滴加1000ml PBS,以缓慢降低Urea浓度，使蛋白自然复性。 （4）最后用聚乙二醇（PEG400）浓缩复性蛋白。 |
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2005-10-28 04:49
urea也有裂解细胞释放蛋白的作用，如果是天然蛋白（除脂类蛋白）一般是比较好溶的，因此我想加尿素的目的可能更偏向于裂解细胞。
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