NADP/NADPH测试盒_细胞生物学检测试剂盒_细胞生物学检测_生化试剂库_商城

 产品说明
***核苷酸是机体重要的代谢产物，因而对它的浓度的检测很有必要。定量测定NADP+/NADPH浓度被医学研究尤其在有关能量转化和细胞或组织的氧化还原方面广泛应用。
简单、直接和自动化的检测NADP+/NADPH手段是非常可取的。博世生物技术公司的NADP+/NADPH测试盒是基于葡萄糖脱氢酶催化氧化葡萄糖，其中形成的NADPH耦合到甲臜(MTT)发色体上。产物的颜色强度(565nm)与样品中NADP+/NADPH浓度成正比。此法特异性高，不受NAD/NADH的干扰。该检测是测量NADP+/NADPH浓度以及它们的比例的非常方便的方法。
适用范围
直接检测：细胞或组织提取物中的NADP+/NADPH。
产品特点
灵敏、准确: 96-孔板检测范围为0.2 ～10 mM NADP+/NADPH。
方便：仅添加单一的工作试剂并在开始和30分钟时读取光密度。室温检测，无须37°C 加热器。
高通量筛选：通过96-孔板高通量的自动化检测，每天可以检测上千份样品。 
试剂盒组成(96孔板供100份测试)
  缓冲液：     10  mL             葡萄糖(1 M): 1.5 mL
  MTT试剂：1.5 mL              NADP标准品:  0.5 mL 1 mM   
  酶试剂：   120 mL               NADP/NADPH 萃取液: 各12 mL
    
贮藏条件：所有试剂均于-20°C保存。签收后6个月有效。
注意事项：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
操作步骤
1. 样品制备: 对于组织样品，称取〜20 mg的组织，用冷却的PBS清洗。对于细胞样品，用冷却的PBS清洗并离心收集~105个细胞。在一1.5 mL Eppindorf 的离心管内用100 mL NADP萃取液或用100 mL NADPH萃取液匀浆样品(组织或细胞)。60°C加热提取物5分钟, 然后添加20 mL缓冲液和100 mL相应萃取液来中和提取物。短暂振荡并以14,000 rpm的转速离心样品5分钟，使用上清液作NADP/NADPH的检测。需测定一式两份样品中提取的NADP 和 NADPH的浓度。
2. 将5 mL 1 mM 标准品和495 mL蒸馏水混合制备500 mL 10 mM NADP 预混液，稀释标准如下。
No Premix + H2O Vol (mL) [NADP] (mM)
1      100mL +     0mL 100 10
2        80mL +   20mL 100 8
3        60mL +   40mL 100 6
4        40mL +   60mL 100 4
5        30mL +   70mL 100 3
6        20mL +   80mL 100 2
7        10mL +   90mL 100 1
8          0mL + 100mL 100 0
  将40 mL 标准品放入透明平底96-孔板的孔内。
     样品: 取样品40 mL放入不同的孔内。
1. 试剂制备: 对每一个反应孔，按60 mL 缓冲液, 1 mL酶试剂, 10 mL 葡萄糖和14 mL MTT的比例配置足量工作试剂。现用现配。
2. 反应: 每孔迅速添加80 mL工作试剂，轻敲孔板使其混合。
3. 在室温下读取565 nm (520-600nm)处“零”时(OD0)和30分钟时(OD30)的光密度。
4. 浓度计算: 从标准品和样品的OD30中减去OD0，依照标准曲线, 使用  DOD 计算, 样品中NADP/NADPH的浓度。
注意：如果样品DOD值大于10 mM标准品DOD值。用蒸馏水稀释样品并且再次检测，结果乘以稀释系数。
实验必需品(未提供)
移液器、透明平底96孔板、吸光度分析仪。
总则
1. 在相应浓度范围，NADP和 NADPH的标准曲线是一致的，由于NADPH标准液不稳定，测试盒仅提供NADP标准品。
2. 该测试是基于酶动力学反应，加入工作试剂应迅速并要短暂混合。推荐使用多通道移液器。
3. 样品制备过程中下列干扰物质应避免：抗坏血素, SDS (>0.2%), 叠氮化钠, NP-40 (>1%) 和 Tween-20 (>1%
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