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产品信息
产品描述
Taq DNA Ligase是一种耐高温连接酶，它能催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5′-***酸和3′-羟基之间形成***酸二酯键。该催化反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对，且两条寡核苷酸链之间没有间隙的条件下才会发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。Taq DNA连接酶以NAD+为辅酶因子，在45℃-65℃范围内均有活性。
产品组分
来源
重组E. coli 菌株，含有从Thermus aquaticus HB8中克隆的连接酶基因。
产品应用
1）用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测；
2）通过PCR扩增掺入***酸化寡核苷酸进行诱变；
3）同源重组。
单位定义
在50 μL 反应体系中，45℃条件下，孵育15 min能使50%的1 μg经BstEII消化的λDNA片段（12 bp粘性末端）发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸内切酶活性：在50 μL反应体系中，10 μL酶溶液与0.5 μg pENZuC DNA作用，37℃孵育4 h，经琼脂糖凝胶电泳，无肉眼可见的环状切口DNA出现。
核酸外切酶活性：在50 μL反应体系中，10 μL酶溶液和10000 cpm/μg***性标记的DNA作用，37℃孵育4 h，溶液中可溶性TCA的释放量小于5.0%。
运输和保存方法
冰袋运输。Taq DNA连接酶于-20℃保存，缓冲液于-80℃保存。
使用方法
1）反应体系配制：
2）反应条件：45℃温育15 min。加入终止染液（50%甘油，50 mM EDTA和溴酚兰）终止反应。
注意事项
1）10×Taq DNA Ligase Buffer中含有辅酶因子NAD+，为了延长NAD+的半衰期，Buffer应于-80℃储存；
2）Taq DNA Ligase不能替代T4 DNA ligase；
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
HB170629
