点击图片查看原图
全血基因组DNA提取试剂盒
产品简介:
本试剂盒为通用型，适合于从土壤，粪便，昆虫，以及其他样本中提取基因组 DNA。对细菌，真菌，昆虫等样本都具有很好的裂解效果，*大限度的保留了生物 DNA的多态性.使用本试剂盒提取的 DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交等实验。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、样品的处理：
1）土壤：称取 0.1-0.3g (根据干湿)土壤，放入研钵中，倒入适量的液氮，立即研磨，重复3 次，使土壤颗粒研成粉末，加 500ul溶液 A，振荡至彻底悬浮。
2）粪便：称取 0.1-0.3g (根据干湿) 粪便，加 500ul 溶液 A，振荡至彻底悬浮。
3）昆虫：称取 0.1-0.3g 昆虫，倒入适量的液氮，立即研磨，重复 3 次，使昆虫研成粉末，加 500ul 溶液
A，振荡至彻底悬浮。
4）未知样品，如为细未状，可直接称取 0.1-0.3g(根据干湿)加 500ul 溶液 A，如为块状，可 0.1-0.3g用液氮研磨成粉未，再加 500ul 溶液 A，振荡至彻底悬浮。
2、向悬浮液中加入 20ul 10mg/ml 的 RNase A，55℃放置 10min。
3、加入20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K，充分混匀，55℃水浴消化，30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次，12000转离心 10min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。
4、加入 500ul 溶液 B，充分混匀。如出现白色沉淀，于 55℃放置 5min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如 溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致上柱后堵柱子，请增加消化时间。
5、加入 500ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，放置 2min (分两次加入，每次 700ul)。
6、12000rpm离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入 500ul漂洗液，12000rpm离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9、12000rpm离心 2min，将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
10、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心 2min。
11、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置 2min，12000rpm离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA.
注意事项:
1、由于样品不同，*终提取的 DNA 含量和纯度也有所不同，一般来说，如果所提取 DNA 用电泳的方法检测不到，PCR会有结果，样品尽可能的新鲜。否则会导致提取的 DN**段较小且提取量也下降。
2、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。
3、如果样品消化不彻底，后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况，可适当延长离心时间。
4、洗脱缓冲液的体积*好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的 pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其 pH值在 8.0 左右(可用NaOH 将水的 pH值调至此范围)，pH值低于 7.0 会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防 DNA降解。
5、DNA浓度及纯度检测（浓度较高时）：得到的基因组DN**段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DN**段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260有显著吸收峰， OD260值为 1 相当于大约 50μg/ml双链DNA、 40μg/ml单链DNA。 OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
本实验相关产品：
| E1020 | EB染色液 |
| D1010 | 6×DNA Loading Buffer |
| T1060 | 50×TAE缓冲液 |
| T1050 | 5×TBE缓冲液 |
| M1060 | D2000DNALadder |
| M1400 | 1kbDNALadder |
| G8142 | GoldViewII型核酸染色剂(5000×) |
以下为索莱宝实验室自产相关试剂盒。
| D1500 | 植物基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 400/700 |
| D1600 | 细菌基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 400/700 |
| D1700 | 动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 400/700 |
| D1800 | 全血基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 400/700 |
| D1850 | 全血基因组DNA提取试剂系统 | 50T/200T | 360/960 |
| D1900 | 酵母基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 400/700 |
| D2100 | 通用基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 400/700 |
| D2300 | 真菌基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 500/850 |
| D2400 | DNA病毒基因组提取试剂盒 | 50T/100T | 400/700 |
| D2600 | 土壤基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 680/1200 |
| D2700 | 粪便基因组DNA提取试剂盒 | 50T/100T | 400/700 |
| R2000 | RNA病毒基因组提取试剂盒 | 50T/100T | 700/1180 |
