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请教 PCR扩增问题

楼主  收藏   举报   帖子创建时间:  2018-03-15 15:28 回复：3 关注量：381
背景：需要不多不少扩下整个片段
上游引物 17bp
 tm值：70度 
gc含量82.4%
下游引物 36bp
tm值：69.6度
gc含量：38.9%
 
问题：在进行扩增的时候目的片段应该是5000+，得到的结果却总是2000左右。请问这个是不是由于下游引物gc含量过低导致的？模版上并不存在关于引物的错配。
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  2. 评论

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  • 剑藏鞘 2018-03-15 17:11
    #1

    程序拉出来

  • 就让往事随风灬 2018-03-15 19:36
    #2

    高gc会难扩一点，但是高at有时候扩增效率也不高，你这个39，感觉还行

  • 就让往事随风灬 2018-03-15 19:38
    #3

    应该是有一些二级结构导致的难扩，可以优化一下，尝试加点DMSO, NMF,可以打开二级结构，提高特异性

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